药物生物转化可产生有药理活性和无药理活性这两种代谢物，而代谢物的活性会影响药物的药理疗效及其副作用。是否用代谢物来研究生物等效性要视具体情况而定。《FDA生物利用度和生物等效性指导原则（2003）》列出在如下几种情形下，需要测定代谢物的浓度：

• 如母体药物在血液、血浆和血清等生物基质中的浓度过低以至于不能被准确测定时，应以测定代谢物的浓度为准。在此种情况下，FDA建议用代谢物的浓度数据计算而得的置信区间来进行生物等效性评估。
• 代谢物经由胃壁代谢或其他体循环前代谢所形成（其通常特征是代谢物在血浆中比母体药物出现得早，浓度也可能比母体药物更高）。如果这种代谢物对药物的临床安全性和有效性有显著影响，FDA建议同时测量母体药物及代谢物的含量。用母体药物浓度数据计算而得的置信区间来评估生物等效性，代谢物的浓度仅供参考。

对映异构体可能具有不同的药理活性和药代动力学特性，通常FDA推荐用立体专属性方法(可以区分两个对映异构体)来进行生物利用度的研究。然而，对仿制药生物等效性的评估，FDA则建议使用立体非专属性方法。其原因是，一般来讲仅凭测量母体药物(或代谢物)中外消旋混合物的含量，就足以区分两种制剂在生物利用度上的差别。这是一个普遍现象，现实中也存在一些不同的个例。

《FDA生物利用度和生物等效性指导原则(2003)》提出，在生物等效性试验中，如以下四种条件同时被满足，则应测定对映异构体各自的含量：①对映异构体具有不同的药理活性；②对映异构体具有不同的药代动力学特性；③含量少(浓度低)的对映异构体为提供药理疗效和安全性的主体；④至少有一个对映异构体呈非线性吸收。在极罕见的情况下，一个药物能同时符合以上四个条件，这时应采用立体专属性方法来进行生物等效性的试验。

如果药物中的活性成分为人体内源性物质，那么实测出的血药浓度包括了人体内本身已有 (内源性) 药物的浓度加上后服入药物(外源性)的浓度，可能会导致生物等效性研究结果的偏差。

运用基线浓度更正法可以有效地纠正这种偏差。先测量给药前体内内源性药物的初浓度，再测量给药后体内药物的总浓度，用这两者之差作为服用药物后药物产生的净浓度。运用此种方法应注意的是人体对许多内源性物质都有一个反馈系统，并且这个反馈系统因服用药物的剂量的改变而产生不同程度的非线性关系的反应。例如氯化钾，人体内的反馈系统对外来氯化钾的反应非常敏感，以至于正常量氯化钾的服用并不能够引起体内(血液中)氯化钾浓度的改变。因此对于这种药物，FDA建议用尿样中排泄的药物量来进行其生物等效性研究。

一般认为药代动力学参数的个体内变异大于30%的药物为高变异性药物，此类药物的研究对受试者人数的要求较高。比如，即便一个参比药品与其本身进行生物等效性比较，如果该药属高变异性药物，受试者人数也有可能需要超过100个，而事实上在这种情况下药品本身并无差别。

除了增加受试者人数和扩大生物等效性试验等现实问题，对于高变异性药物来讲，采用生物等效性研究的常规标准来确定其生物等效性还可能在伦理观上难以被接受。FDA为了减少受试者人数、降低病人的危险系数，选择采取了比例标化平均生物等效性法（Scaled Average Bioequivalence）。这种方法允许根据参比药品个体内变异的程度来决定生物等效性的衡量标准。参比药品个体内变异性参数可由重复或部分重复设计中，在不同的时段给同样的受试者服用两次参比药物而得到。

值得注意的是此法对参数点估值(point estimate)，即受试药品与参比药品几何均数比的差别缺乏敏感性，可能会导致两种原本有很大差别性的药物被误认为是生物等效性的。因此，FDA建议在比例标化平均生物等效性法的基础上，加入对参数点估值的限制。例如，某药物通过了生物等效性的置信区间的要求标准(比例标化平均生物等效性法)，但如果受试药品与参比药品的均数比超过了预先设定的标准(如±20%)，那么这两种药物也不能被认为是生物等效的。总之，对于高变异性药物，比例标化平均生物等效性法较之于传统的生物等效性评估方法具有一定的优越性。目前美国仿制药生产厂家正在利用这种新方法来证明高变异性药物的生物等效性。

药物若不需经过全身系统性循环就可到达其作用部位，这类药物被定义为局部作用药物。对于局部作用药物来说，生物等效性的评估方法是根据药物本身的特性，以及药品的物理化学性质，生物利用度，给药途径，药物作用部位，和对活性成分的检测能力而决定的。 FDA 建议使用灵敏度和准确度最高，重复性最好的试验方法来进行局部作用药物的生物等效性评估。

对于局部作用药物而言，血药浓度不一定能够正确地反映药物的药效活性，因此需要一些其它的方法进行生物等效性的研究。例如，皮肤外用药品、喷鼻剂、吸入剂等，均属于局部作用药物。对于许多这类药品，FDA建议采用疗效指标为临床终点进行生物等效性评估和研究。

应用药代动力学法来研究全身性吸收药物的生物等效性目前已较为成熟。而一些特殊性的药物，如内源性物质和高变异性药物，其等效性研究需要新的试验设计和统计学方法。局部作用药物更为复杂，应针对具体的药物设计不同的方法。对于皮肤外用药物，局部作用喷鼻剂和吸入剂类仿制药来说，其生物等效性试验的要求对这类药品的研发具有非常重要的影响。因此，开发更新、更有效的生物等效性研究方法将会极大地促进这类仿制药品的研发和上市。

本文节选自：李冰, 余煊强. 特殊生物等效性评价方法介绍. Journal of China Prescription Drug. 2009.1. No.82: 51-53