BLA上市申请，CMC需要提交哪些基本信息？
参考ICH M4Q(R1) The Common Technical Document for the Registration of Pharmaceuticals for Human Use: Quality (ICH M4Q) 结构准备CMC的信息。每个章节不能只是堆放方案或报告，而要对相关内容进行总结描述，然后附上方案、报告等文件。BLA申请时需要提交所有的文档、包括参考文献、报告、方案、SOP。文件中要建立超链接确保可以链到对应的附件。这些附件既可以放在相应的M3章节下也可以单独放在3.2.R模块。
FDA对BLA阶段分析方法验证（assay validation）的要求是什么？与IND阶段的分析方法验证（assay qualification）有什么区别？
这个问题主要讨论的是非药典方法的验证，比如用于DS和DP的放行检测的病毒滴度、效价、杂质残留、细胞群或细胞鉴别。方法 qualification 和validation的关键区别在于检测方法的严格性。两者的核心要求都是分析方法必须适合其预期用途。而qualification倾向关注方法的基本适用性，validation则是在更严格、更复杂的条件下确保方法的稳定性和一致性，能适应多种环境和条件下的商业化产品的检测。
Validation需要建立接受标准（acceptance criteria, AC），AC可以根据过往的实验经验建立。不同类型的分析方法对应不同的方法验证。通常像鉴别检测、产品属性的定量检测、产品杂质的限度检测这三类检测的验证参数都会不同，也不是所有验证参数都适用于每一个方法。验证内容一般包括准确度（accuracy）、精密度（precision，包括重复性repeatability和中间精密度intermediate precision）、专属性（specificity）、检测限（detection limit）、定量限（quantitation limit）、线性（linearity）、范围（range）、耐用性（robustness）。具体可以参考2015 FDA 指南 Analytical Procedures and Methods Validation for Drugs and Biologics, 以及 2024 更新的 ICH 指南 Q2(R2) Validation of Analytical Procedures (ICH Q2)。尤其是ICH Q2，里面的表格清晰的展示了特定检测方法类型需要的不同验证参数。
FDA在评估分析方法验证（assay qualification or validation）时最关注什么？
检测方法的性能参数都会审查，比如准确度、精密度、专属性、灵敏度、线性、范围、耐用性。其中，精密度尤为关注，特别是日常检测条件下测量检测方法的中间精密度，以及由特定设备、分析人员、日期等因素引入的随机误差，这些误差可能导致不同的检测结果。确定中间精密度时，使用单批样品单独运行多次，在不同的日期、分析人员、设备等条件下，测量结果的接近度并计算变异系数（CV%）。不同的分析方法或检测的属性，其可接受CV%也不同。腺相关病毒载体基因组强度分析（AAV vector genome strength assay）的CV%建议不超过15%。如果检测方法精密度不足，可以在日常样品检测中增加额外的重复测试或稀释步骤，或者多次进行检测，并在分析证书上报告平均结果。可以用一个参考品用于标准化，报告相对于参考品的检测结果。这样，测试样品和参考品所受到的变量影响相同，就会抵消部分变化带来的影响。或者，可以直接用精密度更高的检测方法，例如用酶联免疫吸附试验（ELISA）代替蛋白质印迹（Western blot）检测。
是否有制定商业化批次质量标准接受限度的指导原则和参考资料？
商业批的放行标准基于临床研究显示的安全有效的批次数据制定，这样可以确保商业批标准与临床研究中使用的批次的属性保持一致。因此，临床研究最好能使用多个批次，有时也可以将PPQ批次用于关键临床的研究。对于批次有限的情况，比如用于治疗罕见病的产品，申请人可以根据已有批次数据建立放行标准，也可以通过设计生产工艺，以便在临床研究中使用更多的批次。如果申请人还是觉得基于现有数据很难建立商业批放行标准，最好尽早和FDA沟通。
BLA应该提交哪些方法验证的资料文件，FDA如何评估这些材料，如果方法验证不充分会有什么风险？
BLA申请人经常会犯的两个错误，一是文件缺少，二是验证不充分。针对第一种，方法验证必须要包含完整的描述。比如分析方法概述，伴随详细的SOP，验证中使用的检测样品、材料、设备或方法都要说明。针对第二种情况，首先，方法验证应遵循标准规程，如果标准规程必须要做变更，递交材料中要包含做的变更以及证明变更的合理性，变更也要作为验证的一环。要基于过往经验数据为方法验证建立“合适”的验收标准。如果设定CV%标准为30%，但是实际变异值是低于5%的，那设定的标准就不合适。虽然说为了使验证通过而放宽标准可以投机取巧，但这可能会在商业领域引起重大问题。
还有一个问题是耐用性测试（robustness testing），这个问题在加速临床开发中经常被忽视。建议在方法开发阶段对耐用性进行研究，可以参考前面提到的方法验证相关的ICH指南。注意，如果方法开发阶段就已经充分研究了耐用性，那么可以把这部分信息在BLA中提交， 无需在方法验证阶段重复进行。例如，在进行最终方法验证之前，评估如流式细胞术抗体批次或ELISA试剂盒批次之间的变异性也是合理的。
FDA对分析方法中使用的标准品的选择、标定、维护和桥接有什么要求？
细胞基因治疗产品的参考品通常是由生产商自己生产的特定的内部参考品，主要用于产品开发和上市。参考品对效价检测尤为重要，FDA建议报告每一批产品的相对效价。相对效价有助于优化方法，降低效价检测中实验之间的变异性，比如cell-based assay。因为产品的效价是基于参考品的相对值，所以从产品开发到上市，参考品的效价必须准确、精确、可靠，不同批次参考品要保持一致。新参考品和旧参考品要建立好桥接。典型的参考品桥接方式是通过多个独立的检测，将新参考品与旧参考品进行比较。检测运行次数应根据方法的中间精密度通过功效分析（power calculation）来确定。在检测运行后，使用等效性测试（equivalence testing）评估新参考品与旧参考品在统计学上是否相似。如果相似，新参考品可以被赋予和旧参考品相同的数值。如果新参考品的数值与旧参考品具有显著的统计学差异，新参考品应被赋予新测得的数值，并在后续计算中使用转换因子（conversion factor）来确定测试样品的效价值。
参考品的标定或桥接都需要记录并在BLA时提交。除了产品特定的参考品外， BLA还需要提交在分析检测中使用的所有其他参考品信息，包括试剂盒中的参考品，并描述如何确保每种参考品的质量和稳定性。
如果药典级原材料无法获得，对非药典级原料材的使用只做风险评估是否足够？
对试剂和原材料的主要关注点是，它们的特性和规格要与声称的保持一致，并且不会在生产过程中带入污染物。FDA建议产品在任何生产阶段都采用最高级别的试剂。如果无法获取规定级别的试剂，那么申请人需要提供它的来源、生产、检测信息以支持其用于生产的符合性。有时可能还需要在投入使用前对每批材料进行检测。
21 CFR 211，E章节提到，cGMP要求每批入厂的原材料必须在检测其是否符合纯度、规格和质量标准之前进行隔离，在确认符合要求后放行或不符合要求时拒收。特定情况下，放行来自合格且可信供应商的原材料时，可结合分析证书的审查只对其做鉴别检测。不管怎样，申请人都应当对采购的试剂建立内控程序，确认各个试剂质量的符合性，并在BLA中提供此信息。
委托第三方机构做的通用型分析检测（generic analytical assays）（即不是专门为特定原料药DS或药品DP 开发的分析方法）可以用于支持我的BLA吗？ 如果可以，BLA时怎么做？
简单来说，可以。举例，检测残留细胞因子的ELISA方法；定量质粒拷贝数残留的PCR。但要注意的是，通用型方法需要的信息详细程度和产品特定开发的方法需要的信息程度是一样的，也就是说需要提交所有分析方法、验证研究以及验证的原始数据，仅提供概述是不够的。此外，还需要提交针对该特定产品的批验证（product-specific qualification）结果。
根据21 CFR 601.2(g)，BLA不允许对DS、DS中间体、DP的信息采用引用药物主文件（master file，MF）的形式，因此BLA 的信息应该直接提交，包括分析方法的SOP、验证报告等。那么委托第三方机构进行检测的就要注意，提前和第三方协调好，确保第三方能够提供这些资料给申请人，不要因此耽误BLA递交和审评。
当某个分析方法被用于已批准的BLA时，任何对该分析方法的修改都必须提交至BLA。申请人需要为修改后的分析方法提交一份补充申请（supplement），并在获得批准前完成审查后方可实施该修改。用于支持临床研究的MF可能不足以支持BLA申请。
哪些研究可以用缓冲液（buffer）代替药物（drug product）开展？
包装容器完整性测试（container closure integrity testing, CCIT）、可提取和可浸出研究（extractable and leachable studies）可以用配方缓冲液（formulation buffer）研究。运输稳定性研究中用于评估产品关键质量属性时必须用药物，如果只是为了评估温控、运输过程中包装的完整性则可以用替代品研究。当然，如果保证不会影响安全和质量，FDA鼓励申请人去和他们沟通替代品的研究方案。
FDA对BLA阶段的可提取和可浸出研究（extractable and leachable studies）的要求是什么？
评估在生产过程、产品货架期以及使用条件下（in-use condition）累积于产品中的浸出物（leachables）的完整特征。评估应采用实时条件（real-time）以及经过验证的分析方法。鉴于分析基质的复杂性，可以使用模拟药品（即不含活性成分的产品）和模拟工艺进行研究，从高风险浸出物可能出现的步骤开始，沿着工艺流程向下游进行测试，并覆盖每个工艺步骤的最小/最大停留时间及温度，以及产品规定的储存和使用条件。
BLA审评中，可提取和可浸出研究有三种常见的问题。第一种是申请人仅依赖包装容器供应商提供的提取物或浸出物研究，这些研究并没有充分模拟DS或DP基质，因此不适用。第二种是只进行提取物研究，没有执行后续的浸出物研究。第三种是只在最终的DS或DP容器上进行研究，忽视了生产过程中对容器材料的暴露情况做研究。
撰稿人：Arlie Ling
