FDA的四位审评专家Kim Schultz 博士、Allen Wensky 博士、Yuxia Jia博士和Xiaofei Wang博士参与此次会议。在这次网络研讨会上，四位专家强调了指南中的关键注意事项，并讨论了 CAR T 细胞产品特有的生产、非临床和临床注意事项，最后对会前征集的代表性问题进行解答。本文将主要关注非临床方面的注意事项。
会议的视频链接：Considerations for the Development of Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cell Products。
图：视频截图
CAR T 细胞疗法是一类发展迅速的细胞疗法，通过基因改造使 T 细胞表达 CAR（嵌合抗原受体），从而识别表面抗原。研发和生产过程包括CAR 设计、基因编辑、制造策略改进等。 随着该领域的发展，CAR 已在不同类型的细胞上进行了探索，CAR T 细胞已被应用于多种适应症，最近还被应用于自身免疫性疾病。
会上Kim Schultz 博士首先讨论了CAR T产品开发中CMC的关键考虑因素，如多抗原目标CAR T细胞设计的影响、自体产品监测以及批次放行测试等。Allen Wensky 博士紧接着介绍了CAR T产品开发中非临床的关键考虑因素。他提到CAR T 细胞的非临床评估可以支持在特定临床研究中合理安全使用产品。由于 CAR T 细胞固有的生物复杂性和可变性，以及难以选择合适动物模型评价其安全性和活性，对 CAR T 细胞进行非临床评价颇具挑战性。应根据具体情况采用体外、计算机模拟和体内评价策略，并结合相关产品的现有非临床和临床数据，以支持临床试验的开展。这份新指南提供了非临床试验的一般注意事项，包括：（1）CAR 构建的非临床注意事项；（2）CAR T细胞成分的非临床注意事项；（3）新型 CAR T 细胞体内试验的讨论；最后是（4）CAR T 细胞修饰的注意事项。
1. CAR 构建的非临床注意事项
新型 CAR 构建物的设计以及将转基因传递给 T 细胞的过程对于确定产品的安全性和活性至关重要。为了评估这些构建物，应提供非临床研究报告，以评估 CAR 对目标抗原/细胞的特异性和亲和性/有效性，也应提供目标抗原的特征描述（如表达谱），这将有助于评价on-target和off-target的活性。
2. CAR T细胞成分的非临床注意事项
用于载体转导的 CAR T 细胞的细胞成分也可能影响 CAR T 细胞最终产品的安全性。 因此，对风险进行全面评估，如评估不受控制的增殖、克隆或基因异常，可能对临床试验和特定供体细胞源的安全性以及相关制造过程非常重要。
3. 新型 CAR T 细胞体内试验的讨论
由于物种特异性，在动物体内测试人类 CAR T 细胞产品无法全面评估其安全性，但使用免疫缺陷的动物肿瘤模型对于证明这些细胞的活性和迁移到靶点的能力非常重要。在某些情况下，为了更全面地评估安全性，也可以使用物种特异性替代物。
4. CAR T 细胞修饰的注意事项
目前越来越多的 CAR T 细胞会进行额外修饰，如自杀基因、基因编辑的异体 CAR T 细胞或添加 T 细胞刺激元件，因此对额外的修饰进行安全性和活性评估是十分必要的。用于传递编码 CAR T 细胞遗传物质的载体类型例如慢病毒载体、转座子、mRNA 或其他用于相同目的的遗传物质，推荐增加细胞因子释放检测，评价 CAR T 细胞对靶抗原特异性或对疑似非靶抗原的反应。为评估 CAR T 细胞依赖刺激生长的可能性，推荐开展细胞因子和抗原依赖性增殖试验。
Q&A环节
本文章仅展示非临床问题，完整问题请参见会议视频。Q：在提交新 CAR 和新靶点的 IND 申请时，哪些是必不可少的非临床研究？
A：使用新型CAR T细胞产品开始临床试验所需的非临床研究的持续时间和范围取决于许多因素。产品的性质（包括以前的临床和非临床经验）、所针对的疾病以及CAR T细胞的附加成分或修饰（如基因编辑的加入）都是IND申请一部分。一般来说，非临床评估通常侧重于表征产品的活性、靶点特异性和目标CAR T细胞产品的整体安全性。遵循指南，遵循指南中的参考文件，并尽早与FDA沟通。
Q：请问是否需要在免疫缺陷的肿瘤动物模型中进行安全性评估？
A：由于动物对人类CAR T细胞产物存在异种排异反应，通常使用严重免疫功能低下的动物模型来提供概念验证数据。然而，由于受体动物缺乏功能性的免疫系统，这些模型获得的安全信息十分有限。在许多情况下，动物实验的物种不表达靶抗原，或者产品在选定的物种中没有交叉反应。
但这些研究确实可以提供关于产品活性的信息，如产品迁移到肿瘤部位并杀死肿瘤靶标的能力，还可提供安全性信息，如异常增殖或脱靶。然而这些数据只是新型CAR T细胞产品安全性评估的一个部分，支持IND申请的其他数据来源包括先前发表的使用类似CAR T细胞产品的免疫缺陷的肿瘤动物模型数据、使用替代产品的非临床数据，或来自使用相同CAR T细胞构建体或产品的研究的交叉引用数据。
Q：细胞因子依赖性生长试验是否有最短的持续时间？
A：细胞因子非依赖性生长测定的设计没有规定。申办方应设计检测方法，以便可以合理评估在没有细胞因子的情况下不受控制的生长的可能性。包括使用多个供体和适当对照，这可能包括未转导的供体细胞、与刺激性细胞因子一起孵育的CAR T细胞或未刺激的供体细胞。
